以下這些Waters液相色譜柱的選擇方法你一定要記住
更新時(shí)間：2019-12-26 點(diǎn)擊次數(shù)：3318次
Waters液相色譜柱的選擇方法概述：
1、填料的種類：
填料的基質(zhì)一般選擇使用多孔硅膠或聚合物等，在細(xì)孔的表面有多種經(jīng)過化學(xué)修飾的官能團(tuán)。
利用目標(biāo)成分疏水性的不同起到分離效果的反相分離模式，利用極性不同進(jìn)行分離的正相分離模式，根據(jù)分子大小的不同而分離的尺寸排阻模式，根據(jù)離子性質(zhì)的不同而達(dá)到分離的離子交換模式，又或者分離光學(xué)異構(gòu)體等，根據(jù)目的的不同，需要選擇對應(yīng)的填料。
作為填充劑的代表十八烷基、辛基、丁基等即在硅膠的細(xì)孔表面化學(xué)鍵合的C18（ODS）、C8或C4等，碳鏈越長，疏水性越強(qiáng)。
2、填料孔徑：
多孔硅膠為基體的填料表面具有無數(shù)的細(xì)孔，需要根據(jù)目的成分的分子量選擇對應(yīng)大小的填料孔徑。微孔徑100?（10nm）對應(yīng)5000左右的分子量。分子量大于5000的，可以選擇300?（30nm）或以上的大孔徑柱子。目的成分能夠進(jìn)入孔的話，才能與官能團(tuán)相互作用從而起到分離的效果。對于大分子蛋白質(zhì)或聚合物等高分子，如果不是大孔徑的基體，與官能團(tuán)的相互作用就會減少。另外，分析低分子時(shí)，選擇太大的微孔，由于會擴(kuò)散故導(dǎo)致峰型可能會展寬。
一般通用的HPLC柱內(nèi)徑為4.6mm，LC/MS內(nèi)徑多為2.1mm，毛細(xì)管HPLC色譜柱為不滿1mm，制備HPLC色譜柱6.0mm以上。通用HPLC系列，內(nèi)徑不同得到的結(jié)果也不同。即使改變內(nèi)徑，根據(jù)色譜柱的截面積比改變相應(yīng)的流速，保留時(shí)間基本不會改變。特別是對于像UV、RI一樣對于濃度要求很高的檢測器而言，流速越小，其對應(yīng)的靈敏度也越高。需要注意的是，通用型HPLC色譜柱內(nèi)徑太小，裝置的死體積影響變大，峰型會變寬。并且根據(jù)HPLC系統(tǒng)使用目的的不同種類也不同，能夠設(shè)定的正確的流速與流速范圍，系統(tǒng)響應(yīng)等也會不同，所以根據(jù)系統(tǒng)不同選擇對應(yīng)的內(nèi)徑是十分重要的。
4、Waters液相色譜柱尺寸（長度）：
一般使用較多的色譜柱的長度，通用型，制備HPLC柱長度為150～250mm，LC/MS為100-150mm，超快速HPLC（UHPLC）為50-100mm。Waters液相色譜柱長度越長理論塔板數(shù)也越高。只是，需要注意，色譜柱長度加倍后，分析時(shí)間與使用壓力也會加倍。對于2μm或者3μm的微粒子，分離度和理論塔板數(shù)都較好時(shí)，將色譜柱的長度變短，可以縮短分析時(shí)間，進(jìn)行快速分析。
5、接頭形式：
Waters液相色譜柱的接頭根據(jù)廠家的不同也會有不同。一般分析色譜柱是1/16英寸外徑的管子使用螺絲進(jìn)行連接，若連接不同的接口，較易產(chǎn)生死體積與漏液現(xiàn)象。
特別對于不銹鋼的配管等，需用套圈固定管子，就必須選擇對應(yīng)的接口形式。
接口形式和螺距有英寸螺距和毫米螺距兩種。一般Waters接口型使用比較普遍。無論是HPLC或UHPLC，通過選擇適當(dāng)?shù)纳V柱接口形式，InertSustain以及Inertsil的性能能夠充分的發(fā)揮。
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